Me Today卸妆凝胶好用吗？Me Today卸妆凝胶值得入手吗

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病理组织中对外源性核酸的细胞摄取被抑制，同时伴有基质金属蛋白酶（MMPs）的过度表达。

第三军医大学罗高兴教授、邓军教授和浙江大学王玮研究员发现CO作为膜功能的调节因子，可以通过RAB5介导的内吞途径在病理条件下重新激活agomir（Ago）的摄取，因此设计了一种响应性纳米颗粒交联注射水凝胶（CO-Ago gel），作为共传递CO和Ago的原型，根据疾病的严重程度抑制MMP过表达。与典型的基质增强基因治疗（Ago gel）相比，CO-Ago gel显著促进了Ago的摄取，在病理条件下实现了一个数量级的靶向基因表达的改善。在心肌大鼠缺血再灌注和糖尿病皮肤创面愈合模型中，评价CO-Ago gel对MMP过表达的治疗作用。结果表明，CO增强转染可能有助于开发下一代用于基因治疗的佐剂和体内疫苗。

相关研究成果以题目为“CO enhances agomir transfection under pathological conditions to inhibit MMP overexpression”的论文于2023年6月10在《Nano Today》上发表。

图1 适应性CO-Ago凝胶重新激活基因摄取以抑制MMPs过表达和增强组织再生的作用和机制示意图

为了确定CO是否能在病理条件下促进基因转染，进而开发了一种能够同时递送CO和Ago的原型纳米颗粒（NP）交联可注射水凝胶（CO-Ago gel）（图1）。

图2 CO-Ago@dmPDA NPs和CO-Ago gel的制备和表征

通过酯化反应和席夫碱反应制备了可降解的介孔聚多巴胺（dmPDA）NPs，根据反应机理，摩尔FPBA可与2摩尔DA发生反应（图2A）。TEM图像证实了dmPDA的中空介孔结构(图2B)，孔径为10nm（图2C），适合RNA传递。在H2O2处理过程中，NPs的结构变得松散，颗粒形状趋于不规则，这与DLS的结果一致（图2D）。利用EDS作图观察了Mn的空间分布，结果表明MnCO是均匀分散的（图2E）。通过FTIR光谱观察到的三峰（2077、2048和2004 cm-1）属于MnCO（图2F）。当Ago：NP比值达到1：2时，CO-Ago@dmPDA中饱和的Ago加载含量达到10.8±1.8wt%（图2G）。所制备的CO-Ago gel（1% CO-Ago@dmPDA + 2% HA-SH）具有良好的注射性和对各种复杂形状的适应性（图2H）。HA-SH含量较高的凝胶具有较高的存储模量（G’)和更短的胶凝时间（图2I、J）。为了加速CO-Ago gel中苯基硼酸酯键的降解，采用更高水平的ROS来探索药物传递行为，在5 mmol L-1H2O2处理12 h后，CO-Ago凝胶的流动性增加（图2K）。在CO Ago gel中装载的MnCO在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中保持稳定（图2L）。Ago释放的趋势与CO的释放趋势一致，当H2O2增加时，Ago的释放速率平行增加（图2M）。

图3 CO-Ago gel促进Ago转染，抑制MMP的体外表达

作者使用一个跨孔模型来研究DPC和CO-Ago gel之间的相互作用（图3A）。用不同浓度的CO gel、Ago gel和CO-Ago gel培养48 h后，检测DPC中miR-874的水平（图3B）。在基因水平上，Ago gel部分抑制了AC16-DPC中MMP-2（67%）和MMP-9（64%），而相同浓度的CO-Ago gel完全抑制了MMP-2和MMP-9的过表达（图3C）。在蛋白水平上，CO-Ago gel抑制了超过99%过量的MMP-2和MMP-9的表达(图3D、E)。IF染色显示，尽管细胞密度降低，但在DPC中MMP-2和MMP-9的荧光信号增加（图3F）。经CO-Ago gel处理后，AC16-DPC中MMP-2的归一化荧光密度显著降低到NC的1.2倍（图3G、H），比基质增强的Ago处理组降低更多（在Ago组中是NC的3.2倍）。

为了阐明CO-Ago gel促进转染的机制，进行了转录组分析。主成分分析（PCA）显示了Ago和CO-Ago gel组之间不同的转录组谱（图4A）。在12764个共表达基因中，与Ago gel组相比，在CO-Ago gel组中有516个上调基因和573个下调基因被鉴定为显著差异表达基因（DEGs）（图4B、C）。KEGG途径富集分析表明，与Ago gel组相比，CO-Ago gel组中内吞通路是改变最显著的基因通路之一（图4D、E）。这些结果表明CO-Ago gel改变了其内吞途径，促进了Ago的转染。与Ago gel组相比，CO-Ago gel组的MHC-I和RAB5在基因和蛋白水平上均显著升高（图4F-H）。通过敲低RAB5C和HLA-H，CO-Ago gel对miR-874水平的提高率分别为52%和29%（图4I、J），表明RAB5C和HLA-H都参与了转染的促进过程，而RAB5C在促进CO-Ago gel的转染过程中发挥了重要作用。

心肌缺血30 min后进行再灌注，随后将50 μL的水凝胶注射到心尖（图5A）。在28天的治疗期间，经胸超声心动图图像显示了典型的心功能M型参数(图5B)。如图5C所示，与Ago gel组相比，CO-Ago gel组射血分数（EF）值显著改善，与健康大鼠相近。在其他临床心功能指标中也观察到类似的趋势，包括左心室（LV）舒张末期容积（图5D）。CO-Ago gel对MMP-2的抑制率为94%，对MMP-9的抑制率为88%，而Ago gel的抑制率分别为48%和43%（图5E、F）。在第14天和第28天，CO-Ago gel组的MMP-2和MMP-9的密度显著低于CO gel组(图5G、H）。与PBS相比，CO gel对左室壁重塑及纤维化无显著影响（图5I-K），与超声心动图结果一致。与其他三组相比，CO-Ago gel对cTnT的保存率*高(图5L、M）。

采用高脂高糖饮食和链脲佐菌素（STZ）注射液建立糖尿病大鼠模型（图6A）。与对照组相比，CO-Ago gel和Ago gel显著加速了伤口闭合(图6B、C）。在处理12天后，CO-Ago gel抑制了75%的MMP-2和72%的MMP-9过表达（图6D）。在蛋白水平上的趋势与在基因水平上的趋势一致(图6E-G）。肉芽化再生、上皮化和胶原蛋白（Col）沉积是伤口恢复的必要过程。H&E染色和Masson染色测定肉芽厚度（GT）（图6H）。与Ago gel组相比，CO-Ago gel组的伤口GT有所改善（图6I），上皮化长度（EL）恢复率接近100%（图6J）。CO-Ago gel组的Col相对沉积密度明显高于其他组（图6K），说明CO-Ago gel可以保护Col不受降解失衡。

总之，本研究证实了在Ago治疗中，涉及过表达和过度氧化应激的病理条件会对基因转染产生不利影响，关键参与了RAB5介导的内吞途径。本研究首次发现CO可以挽救这种被抑制的内吞途径，增强在DOX处理的已建立的细胞系和原代细胞中Ago的转染。在心肌缺血再灌注和糖尿病皮肤创面愈合模型中验证了该模型的体内适应性和广泛的范围。目前的工作为抑制MMP过表达的策略和临床基于基因的治疗和疫苗提供了一个有前途的CO增强转染平台。

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